Notch 3 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421933-LAC

Notch3 kodiert Notch 3, einen Single-Pass-Transmembranrezeptor, der juxtakrines Signaling vermittelt und damit Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierung und Gewebehomöostase steuert. Nach Ligandenbindung führt eine proteolytische Prozessierung zur Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne, die über RBPJ/CSL-Komplexe Transkriptionsprogramme reguliert und dabei mit Signalwegen interagiert, die Proliferation und Linienfestlegung steuern. In Mausmodellen ist die Notch3-Aktivität insbesondere für die Biologie der vaskulären glatten Muskulatur, neuroentwicklungsbezogene Prozesse und die Funktion von Immunzellen relevant; eine fehlregulierte Signalübertragung wird zudem häufig als Modellsystem genutzt, um kontextabhängige onkogene und entwicklungsbiologische Phänotypen zu untersuchen. Da Notch-Signaling stark dosis- und zeitabhängig ist, ist eine präzise Modulation des endogenen Notch3 wichtig, um Pathway-Crosstalk und die Dynamik transkriptioneller Netzwerke zu analysieren.

Notch 3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Notch3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Notch 3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Notch3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Notch 3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Notch3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.