Noggin Plasmide Double Nickase (h): sc-402090-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Noggin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Noggin Double Nickase Plasmid (h) e il Noggin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NOG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Noggin Antibody (2C10): sc-293439
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Noggin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402090-NIC | 20 µg | $410.00 |
NOG codifica per noggin, un antagonista secreto delle proteine morfogenetiche dell’osso (BMP) che contribuisce a definire il patterning embrionale e regola la differenziazione osteogenica e neuroectodermica limitando la segnalazione dei recettori BMP–SMAD1/5/8. Legandosi a BMP2, BMP4 e ligandi correlati nello spazio extracellulare, noggin modula gradienti che controllano le decisioni sul destino cellulare, la morfogenesi tissutale e l’omeostasi scheletrica. L’alterazione del controllo delle BMP dipendente da NOG è stata associata a malformazioni scheletriche congenite e a difetti dello sviluppo craniofacciale, e uno squilibrio nella via delle BMP viene spesso studiato in contesti di fibrosi e di rimodellamento del microambiente tumorale. In quanto nodo di via, NOG è ampiamente utilizzato per analizzare il crosstalk BMP/TGF-β e i programmi di differenziamento in modelli di cellule staminali e progenitrici umane.
Noggin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NOG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NOG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NOG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NOG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.