NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403839

Übersicht

NMNAT3 kodiert die Nicotinamid-Mononukleotid-Adenylyltransferase 3 (NMNAT-3), ein mitochondriales Enzym, das den letzten Schritt der NAD+-Biosynthese aus Nicotinamid-Mononukleotid katalysiert und so die für den oxidativen Stoffwechsel erforderlichen NAD+-Pools in den Organellen aufrechterhält. Durch die Kontrolle NAD+-abhängiger Redoxreaktionen und die Unterstützung sirtuin- und PARP-gekoppelter Signalwege beeinflusst NMNAT-3 die mitochondriale Homöostase, zelluläre Stressantworten und die Energiebilanz. Eine veränderte NMNAT3-Aktivität wurde mit einer dysregulierten NAD+-Homöostase und mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht – Prozesse, die an Neurodegeneration, kardiometabolischen Erkrankungen und der metabolischen Anpassung von Tumorzellen beteiligt sind. Als mitochondrialer NAD+-Knotenpunkt ist NMNAT-3 relevant für Studien zur Bioenergetik, zur mitochondrialen Erhaltung und zu NAD+-gekoppelten Signalwegen.

Das NMNAT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NMNAT3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NMNAT3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NMNAT3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NMNAT-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NMNAT3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NMNAT-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NMNAT3-Exone abzielen, die für die NMNAT-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NMNAT3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NMNAT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NMNAT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NMNAT3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NMNAT-3 HDR-Plasmid (h) und NMNAT-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NMNAT3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NMNAT3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.