NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403839

概要

NMNAT3は、ニコチンアミドモノヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼ3（NMNAT-3）をコードしています。NMNAT-3はミトコンドリアに局在する酵素で、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）からNAD+を生合成する最終段階を触媒し、酸化的代謝に必要なオルガネラ内NAD+プールを維持します。NAD+依存性の酸化還元反応を制御し、さらにサーチュインおよびPARPに関連するシグナル伝達を支えることで、NMNAT-3はミトコンドリア恒常性、細胞ストレス応答、エネルギーバランスに影響を及ぼします。NMNAT3活性の変化は、NAD+代謝の破綻やミトコンドリア機能不全と関連づけられており、これらは神経変性、心血管・代謝性疾患、ならびに腫瘍細胞の代謝適応に関与する過程として示唆されています。ミトコンドリアにおけるNAD+の要所（ノード）として、NMNAT-3はバイオエナジェティクス、ミトコンドリア維持、NAD+共役シグナル伝達経路の研究において重要です。

NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNMNAT3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NMNAT3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NMNAT3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NMNAT-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NMNAT-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NMNAT3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NMNAT-3の機能に不可欠なNMNAT3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NMNAT3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNMNAT-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NMNAT3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NMNAT-3 HDRプラスミド（h）および NMNAT-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNMNAT3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNMNAT3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。