Plasmide CRISPR/Cas9 KO NKp44 (h): sc-407295

Présentation

NCR2 code pour NKp44 (CD336), un récepteur activateur des cellules tueuses naturelles (NK) induit lors de l’activation des cellules NK, et qui transmet ses signaux via son association avec l’adaptateur TYROBP (DAP12) porteur d’un ITAM. L’engagement de NKp44 par des ligands cellulaires ou associés à des agents pathogènes favorise la dégranulation des cellules NK et la sécrétion de cytokines, s’intégrant aux voies de surveillance immunitaire innée qui façonnent les réponses cytotoxiques. L’expression de NCR2 et la signalisation médiée par NKp44 ont été étudiées dans des contextes de dérégulation immunitaire, notamment dans des microenvironnements inflammatoires et des altérations de la fonction des cellules NK dans le cancer et les infections chroniques. En tant que récepteur de surface à expression inductible, NKp44 est aussi utilisé pour analyser les états d’activation des cellules NK et le dialogue (cross-talk) des récepteurs avec d’autres récepteurs NK.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NKp44 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NCR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NCR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NCR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NKp44.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NCR2 pour l'étude de la signalisation de NKp44, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NCR2 essentiels à la fonction de NKp44
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NCR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NKp44 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NKp44 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NCR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NKp44 plasmide HDR (h) et le NKp44 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NCR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NCR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.