Plasmide CRISPR/Cas9 KO NK-2R (h): sc-403149

Présentation

TACR2 code le récepteur humain de la neurokinine‑2 (NK‑2R), un RCPG de classe A activé par des tachykinines telles que la neurokinine A, et se couplant principalement à la signalisation Gq/11. L’activation du récepteur stimule la phospholipase Cβ, entraînant la production en aval d’inositol‑trisphosphate et de diacylglycérol, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et l’activation des voies PKC/MAPK, ce qui façonne des programmes transcriptionnels et contractiles. NK‑2R est exprimé dans le muscle lisse, les tissus gastro‑intestinaux et respiratoires, ainsi que dans certaines populations neuronales, où il régule la motilité, le tonus des voies aériennes et la signalisation inflammatoire neurogène. Une signalisation TACR2 dérégulée a été associée à une modification de la réactivité du muscle lisse et à une modulation des circuits inflammatoires, ce qui justifie son étude dans des modèles d’hyperréactivité des voies aériennes de type asthmatique, de dysmotilité gastro‑intestinale et de voies des neuropeptides liées à la douleur.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NK-2R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TACR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TACR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TACR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NK-2R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TACR2 pour l'étude de la signalisation de NK-2R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TACR2 essentiels à la fonction de NK-2R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TACR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NK-2R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NK-2R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TACR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NK-2R plasmide HDR (h) et le NK-2R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TACR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TACR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.