Plásmido CRISPR de Activación (h) NK-1R: sc-401004-ACT

TACR1 codifica el receptor humano de neuroquinina 1 (NK-1R), un GPCR de clase A que se une al neuropéptido taquiquinina sustancia P y se acopla principalmente a la señalización de Gq/11. La activación de NK-1R promueve la movilización de inositol fosfato y calcio dependiente de fosfolipasa C, con la activación posterior de PKC, MAPK/ERK y programas transcripcionales que modulan la excitabilidad neuronal, la inflamación neurogénica y la contractilidad del músculo liso. TACR1 se expresa en los sistemas nerviosos central y periférico, así como en compartimentos inmunitarios y epiteliales, vinculando la comunicación neuroinmune con respuestas de barrera y vasculares. Las alteraciones en la señalización de TACR1/NK-1R se han asociado con procesos inflamatorios y relacionados con el dolor, desregulación de las vías respiratorias y del tracto gastrointestinal, y cambios dependientes del contexto en la señalización del microambiente tumoral, lo que respalda estudios mecanísticos en modelos celulares relevantes para la enfermedad.

NK-1R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TACR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NK-1R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TACR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TACR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NK-1R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TACR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NK-1R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NK-1R en células tumorales con expresión de TACR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.