Plasmide CRISPR/Cas9 KO NIPP1 (h): sc-406193

Présentation

PPP1R8 code l’inhibiteur nucléaire de la protéine phosphatase 1 (NIPP1), une sous-unité régulatrice multifonctionnelle qui module la déphosphorylation dépendante de PP1 au sein du noyau. NIPP1 participe au contrôle de programmes transcriptionnels, de l’épissage du pré-ARNm et de processus de la chromatine liés au cycle cellulaire, en coordonnant l’activité de la phosphatase avec des complexes associés à l’ARN et à la chromatine. Par ces fonctions, PPP1R8 contribue au maintien de la fidélité de la signalisation nucléaire et des états régulateurs du génome qui influencent la prolifération et les réponses au stress. Une régulation altérée de la signalisation de PP1 et des voies nucléaires de contrôle de la phosphorylation impliquant NIPP1 a été étudiée dans des contextes pertinents pour la biologie tumorale ainsi que pour d’autres troubles caractérisés par une croissance et une différenciation déréglées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NIPP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPP1R8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPP1R8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPP1R8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NIPP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPP1R8 pour l'étude de la signalisation de NIPP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PPP1R8 essentiels à la fonction de NIPP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPP1R8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NIPP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NIPP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPP1R8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NIPP1 plasmide HDR (h) et le NIPP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPP1R8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPP1R8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.