NIPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406193

概要

PPP1R8は、核内プロテインホスファターゼ1（PP1）の阻害因子であるNIPP1（nuclear inhibitor of protein phosphatase 1）をコードしています。NIPP1は多機能な制御サブユニットであり、核内におけるPP1依存的な脱リン酸化を調節します。NIPP1は、ホスファターゼ活性をRNA関連およびクロマチン関連複合体と協調させることで、転写プログラムの制御、pre-mRNAスプライシング、ならびに細胞周期に連動したクロマチン過程に関与します。これらの役割を通じて、PPP1R8は核内シグナル伝達の忠実性や、増殖およびストレス応答に影響するゲノムの制御状態の維持に寄与します。NIPP1が関与するPP1シグナルや核内のリン酸化制御経路の調節異常は、腫瘍生物学や、増殖・分化の制御破綻に関わるその他の疾患に関連する文脈で検討されてきました。

NIPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPP1R8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPP1R8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPP1R8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NIPP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NIPP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPP1R8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NIPP1の機能に不可欠なPPP1R8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPP1R8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NIPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNIPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPP1R8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NIPP1 HDRプラスミド（h）および NIPP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPP1R8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPP1R8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。