NIMP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413705-ACT

RTN4IP1 kodiert NIMP, ein Protein der mitochondrialen Matrix, das mit der NOGO-Rezeptor-Signalwegkomponente RTN4 interagiert und die oxidative Phosphorylierung unterstützt, indem es die Funktion der Atmungskette und das Redoxgleichgewicht aufrechterhält. NIMP trägt zur mitochondrialen Bioenergetik, zur Homöostase von Kofaktoren und zum Schutz vor oxidativem Stress bei und verknüpft seine Aktivität damit mit der ATP-Produktion und der Kontrolle reaktiver Sauerstoffspezies. Eine veränderte RTN4IP1-Funktion wurde mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, darunter neurodegenerative Erscheinungsbilder und optische Neuropathien, was es für Studien zur mitochondrialen Qualitätskontrolle und zur Stressantwort-Signalgebung relevant macht. In humanen Zellmodellen wird die Modulation der RTN4IP1-Expression genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die den mitochondrialen Stoffwechsel mit der Aufrechterhaltung neuronaler Funktionen und krankheitsrelevanter zellulärer Vulnerabilität verknüpfen.

NIMP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RTN4IP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NIMP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RTN4IP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RTN4IP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NIMP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RTN4IP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NIMP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NIMP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RTN4IP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.