Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416614-NIC

CHRNA7は、ニコチン性アセチルコリン受容体のα7サブユニットをコードしている。この受容体は、同一サブユニット5量体からなるリガンド作動性カチオンチャネルであり、迅速なコリン作動性シグナル伝達とカルシウム流入を仲介する。α7 nAChRの活性は、MAPK/ERK、PI3K–AKT、CaMKシグナル伝達などの細胞内Ca²⁺依存性経路に影響を与え、その結果、神経伝達物質放出、シナプス可塑性、神経細胞の興奮性を形成する。免疫系およびグリアの文脈では、CHRNA7はサイトカイン産生のコリン作動性調節を介して炎症反応の制御に寄与する。CHRNA7の発現または機能の破綻は、神経精神疾患および神経変性疾患の病態と関連づけられており、認知、感覚ゲーティング、炎症関連の神経機能障害の観点から広く研究されている。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。