NGF Plasmide Double Nickase (m): sc-421889-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NGF Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NGF Double Nickase Plasmid (m) e il NGF Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ngf. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NGF Antibody (NGF30): sc-32300
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NGF Plasmide Double Nickase (m) | sc-421889-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NGF Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421889-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ngf codifica il fattore di crescita nervoso (NGF), una neurotrofina secreta essenziale per la sopravvivenza, la differenziazione e il mantenimento dei neuroni simpatici e sensoriali durante lo sviluppo e nei tessuti adulti. NGF segnala principalmente tramite NTRK1/TrkA e p75NTR per regolare le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ, collegando la disponibilità del ligando alla crescita dei neuriti, alla plasticità sinaptica e alle risposte neuronali allo stress. Nei modelli murini, un’alterata segnalazione di NGF è associata a cambiamenti nella sensibilizzazione dei nocicettori, nelle interazioni neuroimmuni e nelle dinamiche di innervazione periferica rilevanti per la biologia del dolore infiammatorio e neuropatico. NGF influenza anche processi non neuronali, inclusi l’attività dei mastociti e il rimodellamento tissutale, rendendo Ngf un nodo utile per studiare il crosstalk dipendente dalle neurotrofine in microambienti rilevanti per la malattia.
NGF Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ngf nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ngf. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ngf. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ngf interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.