Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NFS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403102-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NFS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NFS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und NFS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NFS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NFS1: sc-365308
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NFS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403102-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NFS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403102-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFS1 kodiert eine Cystein-Desulfurase, die die de-novo-Biogenese von Eisen-Schwefel-(Fe–S)-Clustern in den Mitochondrien einleitet, indem sie Schwefel aus L‑Cystein mobilisiert und an die ISC-Assemblierungsmaschinerie überträgt. Über diesen Weg unterstützt NFS1 die Reifung Fe–S‑abhängiger Enzyme, die an der oxidativen Phosphorylierung, dem Liponsäurestoffwechsel sowie der Aufrechterhaltung der Integrität des mitochondrialen und nukleären Genoms beteiligt sind. Störungen von NFS1 können die mitochondriale Atmung und die Redoxhomöostase beeinträchtigen, mit nachgelagerten Effekten auf Zellproliferation und Stressantworten. Genetische und funktionelle Studien bringen eine beeinträchtigte Fe–S‑Cluster-Assemblierung mit multisystemischen Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen in Verbindung, wodurch NFS1 ein zentrales Ziel für mechanistische Untersuchungen metabolischer Verwundbarkeit und der Genomstabilität ist.
NFS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.