NFKBIA/IkB alpha Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421878

Visão geral

Nfkbia codifica o inibidor alfa de NF-κB (IκBα), um regulador negativo central da sinalização canônica de NF-κB que se liga aos complexos RelA/p50 e os mantém no citoplasma em condições basais. Após estímulo por citocinas pró-inflamatórias, ligantes de receptores do tipo Toll (TLR) ou sinalização do receptor de antígeno, a IκBα é fosforilada pelo complexo IKK e degradada, permitindo a translocação nuclear de NF-κB e a transcrição de genes ligados à imunidade, resposta ao estresse e sobrevivência celular. Esse circuito de retroalimentação molda a ativação imune inata e adaptativa, a produção de citocinas e as decisões de destino celular, sendo amplamente usado como ponto de entrada mecanístico para estudar o remodelamento tecidual impulsionado por inflamação e a sinalização oncogênica. Em sistemas murinos, a perturbação de NFKBIA é frequentemente explorada para dissecar a conversa cruzada da via com programas de MAPK, interferon e apoptose em modelos de desregulação imune e sinalização no microambiente tumoral.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NFKBIA/IkB alpha (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nfkbia em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nfkbia, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nfkbia na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NFKBIA/IkB alpha.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nfkbia para a investigação da sinalização de NFKBIA/IkB alpha, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nfkbia críticos para a função NFKBIA/IkB alpha
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nfkbia para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NFKBIA/IkB alpha Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NFKBIA/IkB alpha Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nfkbia. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NFKBIA/IkB alpha Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NFKBIA/IkB alpha (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nfkbia para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nfkbia definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.