NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421878

Übersicht

Nfkbia kodiert den NF-κB-Inhibitor alpha (IκBα), einen zentralen negativen Regulator des kanonischen NF-κB-Signalwegs, der an RelA/p50-Komplexe bindet und sie unter basalen Bedingungen im Zytoplasma zurückhält. Nach Stimulation durch proinflammatorische Zytokine, Toll-like-Rezeptor-Liganden oder Antigenrezeptor-Signale wird IκBα durch den IKK-Komplex phosphoryliert und abgebaut, wodurch NF-κB in den Zellkern translozieren und die Transkription von Genen der Immunantwort, Stressantwort und Zellüberlebensprogramme auslösen kann. Diese Rückkopplungsschaltung prägt die Aktivierung der angeborenen und adaptiven Immunität, die Zytokinproduktion sowie Entscheidungen über das Zellschicksal und wird häufig als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um entzündungsgetriebenes Gewebe-Remodeling und onkogene Signalübertragung zu untersuchen. In Mausmodellen wird eine Störung von NFKBIA häufig eingesetzt, um das Zusammenspiel mit MAPK-, Interferon- und apoptotischen Programmen in Modellen der Immundysregulation und der Signalgebung in der Tumormikroumgebung zu analysieren.

Das NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nfkbia-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nfkbia-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nfkbia nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NFKBIA/IkB alpha-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nfkbia-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NFKBIA/IkB alpha-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nfkbia-Exone abzielen, die für die NFKBIA/IkB alpha-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nfkbia-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nfkbia-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NFKBIA/IkB alpha HDR-Plasmid (m) und NFKBIA/IkB alpha HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nfkbia-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nfkbia-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.