neuroserpin Double Nickase Plasmid (m): sc-423113-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das neuroserpin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- neuroserpin Double-Nickase-Plasmid (m) und neuroserpin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Serpini1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: neuroserpin: sc-48360
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
neuroserpin Double Nickase Plasmid (m) | sc-423113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
neuroserpin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Serpini1** kodiert Neuroserpin, einen sekretieren Serinprotease-Inhibitor, der vor allem die Aktivität des gewebespezifischen Plasminogenaktivators (tPA/PLAT) im Nervensystem moduliert. Durch die Begrenzung perizellulärer Proteolyse beeinflusst Neuroserpin den Umbau der extrazellulären Matrix, synaptische Plastizität, Neuritenauswuchs sowie aktivitätsabhängige Signalwege, die mit neuronaler Survival und der Verfeinerung neuronaler Schaltkreise verknüpft sind. Serpini1 ist zudem an der zellulären Proteostase beteiligt, da Fehlfaltung oder veränderte Expression ER-Stressantworten und die Proteinkontrolle beeinträchtigen kann. Eine Dysregulation der Neuroserpin–tPA/Plasmin-Achse wird mit neurodegenerativen und neuroinflammatorischen Mechanismen in Verbindung gebracht, wodurch Serpini1 ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Signalwegen darstellt, die Proteolyse mit neuronaler Funktion koppeln.
neuroserpin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Serpini1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Serpini1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Serpini1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Serpini1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.