neuroserpin Plasmide Double Nickase (m): sc-423113-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- neuroserpin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il neuroserpin Double Nickase Plasmid (m) e il neuroserpin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Serpini1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: neuroserpin Antibody (C-9): sc-48360
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
neuroserpin Plasmide Double Nickase (m) | sc-423113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
neuroserpin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Serpini1 codifica la neuroserpina, un inibitore secretato delle proteasi seriniche che modula principalmente l’attività dell’attivatore tissutale del plasminogeno (tPA/PLAT) nel sistema nervoso. Limitando la proteolisi pericellulare, la neuroserpina influenza il rimodellamento della matrice extracellulare, la plasticità sinaptica, la crescita dei neuriti e le vie di segnalazione dipendenti dall’attività collegate alla sopravvivenza neuronale e al perfezionamento dei circuiti. Serpini1 è inoltre implicato nella proteostasi cellulare, poiché il ripiegamento errato o un’espressione alterata possono perturbare le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico (ER) e i meccanismi di controllo qualità delle proteine. La disregolazione dell’asse neuroserpina–tPA/plasmina è stata associata a meccanismi neurodegenerativi e neuroinfiammatori, rendendo Serpini1 un bersaglio rilevante per studiare le vie che collegano la proteolisi alla funzione neuronale.
neuroserpin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Serpini1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Serpini1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Serpini1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Serpini1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.