neuropilin-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400428-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das neuropilin-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- neuropilin-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und neuropilin-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NRP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: neuropilin-1: sc-5307
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
neuropilin-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400428-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
neuropilin-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400428-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NRP1 kodiert Neuropilin‑1, einen multifunktionalen transmembranen Korezeptor, der die Signalübertragung von Semaphorinen der Klasse 3 sowie mehrerer Wachstumsfaktoren, darunter Liganden der VEGF‑Familie, moduliert und dadurch Axonführung, Angiogenese und die Migration von Endothelzellen reguliert. Neuropilin‑1 ist an Signalwegen beteiligt, die die Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion und Gefäßmusterbildung steuern, mit kontextabhängigen Effekten auf die neuronale Entwicklung und das Trafficking von Immunzellen. Eine dysregulierte NRP1‑Expression oder -Signalgebung wird mit veränderter vaskulärer Remodellierung, entzündlichen Mikroumgebungen und tumorassoziierten angiogenen Programmen in Verbindung gebracht, was NRP1 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Signalübertragung in der Mikroumgebung macht. In vitro wird die Perturbation von NRP1 häufig in Endothel‑, Neuronen‑ und Krebszellmodellen untersucht, um ligandenabhängige Rezeptorkomplexe und nachgeschaltete Umverdrahtungen von Signalwegen zu kartieren.
neuropilin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NRP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NRP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NRP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NRP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.