neuropilin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421964

Panoramica

Il gene murino **Nrp1** codifica la neuropilina-1, un co-recettore transmembrana multifunzionale che lega le semaforine di classe 3 e i ligandi della famiglia VEGF per modulare la guida assonale, il germogliamento angiogenico e il comportamento delle cellule “tip” endoteliali. La neuropilina-1 coordina la segnalazione con VEGFR2, le plessine e le integrine, influenzando la dinamica del citoscheletro, la migrazione cellulare e la permeabilità vascolare attraverso vie che includono PI3K/AKT, MAPK/ERK e le reti delle GTPasi Rho. Nei compartimenti immunitario e stromale, NRP1 contribuisce al traffico cellulare e al rimodellamento tissutale, collegandola a microambienti infiammatori e a processi di sviluppo. Un’attività di NRP1 deregolata è stata associata a patterning vascolare aberrante e ad angiogenesi associata ai tumori, rendendola un nodo frequentemente studiato nella biologia neurovascolare e dei microambienti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO neuropilin-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nrp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nrp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nrp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina neuropilin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nrp1 per lo studio della segnalazione di neuropilin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nrp1 critici per la funzione di neuropilin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nrp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal neuropilin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal neuropilin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nrp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal neuropilin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR neuropilin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nrp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nrp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.