Plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuron navigator 2 (m): sc-429641

Présentation

Nav2 code pour neuron navigator 2, une protéine associée au cytosquelette, enrichie dans les neurones, impliquée dans l’extension des neurites, le guidage axonal et la migration neuronale via la coordination de la dynamique des microtubules et du comportement du cône de croissance. Dans le système nerveux de la souris, en développement comme à l’âge adulte, NAV2 est associé à des processus qui façonnent la formation des circuits neuronaux, notamment l’établissement de la polarité et la croissance orientée en réponse à des signaux de guidage. Des altérations des voies associées à NAV2 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et de dysfonctionnements du système nerveux, où une connectivité perturbée et un défaut d’organisation des axones constituent des caractéristiques centrales. Ainsi, Nav2 représente une cible utile pour explorer les mécanismes de morphogenèse neuronale et de remodelage du cytosquelette dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuron navigator 2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nav2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nav2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nav2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Neuron navigator 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nav2 pour l'étude de la signalisation de Neuron navigator 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nav2 essentiels à la fonction de Neuron navigator 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nav2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Neuron navigator 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Neuron navigator 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nav2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Neuron navigator 2 plasmide HDR (m) et le Neuron navigator 2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nav2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nav2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.