neuroglobin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-425686-LAC

O gene Ngb de camundongo codifica a neuroglobina, uma globina hexacoordenada enriquecida em neurônios e em outras células metabolicamente ativas, onde contribui para o manejo de oxigênio e para o equilíbrio redox. A neuroglobina tem sido associada à homeostase mitocondrial, ao tamponamento de espécies reativas de oxigênio e às respostas celulares à hipóxia e ao estresse oxidativo, conectando-se a vias que regulam a apoptose e o metabolismo energético. Alterações na expressão de Ngb têm sido investigadas em modelos de isquemia cerebral, neurodegeneração e estresse retiniano, nos quais a disponibilidade de oxigênio e a função mitocondrial são limitantes. Como resultado, a neuroglobina é frequentemente estudada por seu papel na resiliência neuronal, na adaptação metabólica e nos mecanismos de lesão oxidativa no sistema nervoso.

As Partículas de Ativação Lentivirais neuroglobin (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ngb numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais neuroglobin (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ngb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de neuroglobin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ngb e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.