Plasmide CRISPR d'Activation (h) neurexin I: sc-401872-ACT

Le gène humain **NRXN1** code la **neurexine I**, un récepteur présynaptique d’adhérence cellulaire qui coordonne la spécification et la maturation des synapses en interagissant avec des partenaires postsynaptiques tels que les **neuroligines** et les **LRRTM**. La neurexine I contribue à organiser la machinerie de libération des neurotransmetteurs, influence l’exocytose dépendante du calcium et soutient la plasticité synaptique dépendante de l’activité, essentielle à l’équilibre des circuits excitateurs–inhibiteurs. La fonction de **NRXN1** est liée à des voies qui régissent la connectivité neuronale, le guidage axonal et les réseaux de signalisation synaptique qui façonnent le développement cortical. Des perturbations génétiques et régulatrices de **NRXN1** ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques des dysfonctionnements synaptiques.

neurexin I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NRXN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

neurexin I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NRXN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NRXN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de neurexin I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NRXN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de neurexin I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie neurexin I dans les cellules tumorales présentant une expression de NRXN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.