Neuregulin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404043-ACT

NRG2 codifica a neuregulina-2, um membro da família de neuregulinas do tipo EGF que atua como ligante de tirosina-quinases receptoras ERBB. Por meio da sinalização ERBB2/ERBB3 e ERBB4, a neuregulina-2 modula a comunicação neuronal e glial, o desenvolvimento de sinapses e a plasticidade dependente de atividade, além de influenciar as saídas das vias PI3K–AKT e MAPK, que regulam sobrevivência e diferenciação. A expressão de NRG2 e a dinâmica da via ERBB têm sido associadas a fenótipos neurodo desenvolvimento e neuropsiquiátricos, e a sinalização neuregulina–ERBB alterada é estudada no contexto de disfunção de circuitos e desequilíbrio sináptico. Essas propriedades tornam o NRG2 um alvo útil para dissecar a sinalização receptor-ligante, redes transcricionais e respostas específicas de tipo celular em modelos celulares humanos.

Neuregulin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neuregulin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neuregulin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neuregulin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neuregulin-2 em células tumorais com expressão de NRG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.