Plasmide CRISPR d'Activation (h) nestin: sc-400156-ACT

Le gène humain **NES** code la **nestine**, une protéine de filament intermédiaire de classe VI, enrichie dans les cellules souches/progénitrices neurales et d’autres précurseurs multipotents, où elle soutient l’organisation du cytosquelette lors de la prolifération rapide, de la migration et de l’engagement de lignée. L’expression de la nestine est étroitement liée aux programmes du développement et au remodelage induit par le stress, en interaction avec des réseaux de signalisation tels que **Notch**, **Wnt/β-caténine** et les voies des facteurs de croissance, qui régulent l’état souche et la différenciation. Dans les tissus adultes, **NES** est souvent induit lors de lésions et de la régénération, reflétant des rôles dans la glie réactive, l’angiogenèse et le remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de la nestine est fréquemment utilisée comme marqueur d’états peu différenciés et a été associée à la plasticité et au caractère invasif des cellules tumorales dans de nombreux contextes cancéreux.

nestin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NES sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

nestin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NES dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NES, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de nestin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NES natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de nestin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie nestin dans les cellules tumorales présentant une expression de NES silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.