Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Nek2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421853
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nek2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Nek2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nek2 Antibody (D-8): sc-55601
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nek2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421853 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Nek2 (NIMA related kinase 2) è una chinasi serina/treonina che si localizza ai centrosomi e regola la separazione dei centrosomi, l’assemblaggio del fuso e la corretta segregazione dei cromosomi durante la mitosi. Nelle cellule murine, l’attività di Nek2 coordina la progressione del ciclo cellulare fosforilando substrati centrosomiali e modulando la dinamica dei microtubuli, contribuendo alla stabilità del genoma. Una deregolazione della segnalazione di Nek2 è stata associata ad amplificazione dei centrosomi, aneuploidia e alterato controllo proliferativo, rendendola rilevante per studi di biologia tumorale e dell’integrità del checkpoint mitotico. Nek2 interagisce inoltre con vie che regolano la risposta al danno al DNA e la dinamica delle ciglia, supportandone l’utilizzo come nodo per analizzare reti di segnalazione legate alla divisione cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nek2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nek2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nek2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nek2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nek2 per lo studio della segnalazione di Nek2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Nek2 critici per la funzione di Nek2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nek2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Nek2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nek2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nek2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Nek2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nek2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nek2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nek2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.