Nebulette Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406565
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Nebulette El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Nebulette, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nebulette Anticuerpo (G-9): sc-393784
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Nebulette Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406565 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
NEBL codifica la nebulette, una proteína específica del corazón que se une a la actina en el disco Z y ayuda a organizar los filamentos delgados y a estabilizar la arquitectura del sarcómero en el músculo estriado. Nebulette conecta los filamentos de actina con los andamiajes de la línea Z y contribuye a la mecanotransducción y a la transmisión de fuerza durante el ensamblaje de las miofibrillas y la contracción. A través de interacciones con proteínas del citoesqueleto y del disco Z, NEBL sostiene la integridad estructural de los cardiomiocitos y vías de remodelación sensibles al estrés. La variación genética o la expresión desregulada de NEBL se han asociado con cardiomiopatías y trastornos relacionados del músculo cardíaco, lo que lo hace relevante para estudios sobre el mantenimiento del sarcómero y la disrupción del citoesqueleto vinculada a la enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nebulette (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NEBL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NEBL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NEBL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nebulette.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NEBL para la investigación de la señalización de Nebulette, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de NEBL críticos para la función de Nebulette
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NEBL para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Nebulette CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nebulette CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NEBL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nebulette (h) y el plásmido HDR Nebulette (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NEBL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NEBL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.