NCKX5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405875

Descripción general

SLC24A5 codifica NCKX5, un intercambiador sodio/calcio dependiente de potasio que regula la homeostasis iónica de los melanosomas y favorece una melanogénesis adecuada en células productoras de pigmento. Al modular el flujo de Ca²⁺ y el equilibrio iónico dentro del sistema endomembranoso, NCKX5 influye en la síntesis de melanina, la maduración de los melanosomas y las vías de depósito del pigmento. La variación genética en SLC24A5 se asocia fuertemente con diferencias dentro del rango normal de la pigmentación humana, y su actividad alterada se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de los melanocitos. Como transportador de membrana con funciones en el tráfico intracelular y el funcionamiento de los orgánulos, NCKX5 ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar cómo el transporte iónico controla los programas de pigmentación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NCKX5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC24A5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC24A5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC24A5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NCKX5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC24A5 para la investigación de la señalización de NCKX5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC24A5 críticos para la función de NCKX5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC24A5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NCKX5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NCKX5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC24A5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NCKX5 (h) y el plásmido HDR NCKX5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC24A5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC24A5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.