Plásmido Doble Nickase (m) NBK: sc-419331-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)NBK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NBK (m) y el plásmido de doble nickasa NBK (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Bik. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) NBK | sc-419331-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) NBK | sc-419331-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Bik codifica NBK, un miembro proapoptótico de la familia BCL-2 del tipo “solo BH3” que promueve la permeabilización de la membrana externa mitocondrial al neutralizar proteínas antiapoptóticas como BCL-2, BCL-XL y MCL1. En células de ratón, NBK contribuye a la apoptosis intrínseca, a la señalización de muerte vinculada al estrés del retículo endoplásmico y a la regulación de la homeostasis tisular mediante la activación de caspasas. La actividad de BIK/NBK se entrecruza con respuestas al estrés asociadas a p53 y con puntos de control regulados por BCL-2 que influyen en las decisiones de supervivencia celular. La desregulación del equilibrio de la familia BCL-2, incluida la alteración de la expresión de Bik, se estudia con frecuencia en contextos como la transformación oncogénica, la selección de células inmunitarias y modelos de neurodegeneración en los que se altera el umbral apoptótico.
NBK El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Bik en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Bik. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Bik. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Bik alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.