Partículas Lentivirales de Activación (h) Na⁺ CP type Xα: sc-407011-LAC

SCN10A codifica el canal de sodio dependiente de voltaje Na+ CP tipo Xα (NaV1.8), una subunidad α formadora del poro que permite la entrada de sodio resistente a la tetrodotoxina y el disparo repetitivo en células excitables. Al modular el inicio y la propagación del potencial de acción, este canal contribuye a programas de excitabilidad de membrana que se solapan con la señalización nociceptiva, la comunicación neuroinmunitaria y las respuestas transcripcionales dependientes de la actividad. La variación genética humana en SCN10A se ha asociado con rasgos de conducción cardíaca y susceptibilidad a arritmias, y la actividad alterada de NaV1.8 se ha vinculado con la neurofisiología relacionada con el dolor y la hipersensibilidad inflamatoria. Estas propiedades hacen de SCN10A una diana útil para investigar la biofísica de los canales de sodio, las vías de señalización impulsadas por la excitabilidad y las relaciones genotipo–fenotipo en sistemas modelo neuronales y cardíacos.

Las partículas de activación lentiviral Na+ CP type Xα (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SCN10A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Na+ CP type Xα (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SCN10A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Na+ CP type Xα. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SCN10A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.