Nanos3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-434074

Übersicht

Nanos3 kodiert ein evolutionär konserviertes RNA-bindendes Protein, das während der Mausentwicklung zum Erhalt des Überlebens primordialer Keimzellen und ihrer Keimbahnidentität beiträgt. Durch die Bindung an Ziel-mRNAs und die Modulation ihrer Stabilität sowie ihrer translationalen Ausbeute trägt NANOS3 zu posttranskriptionellen Genregulationsprogrammen bei, die Keimzellmigration, Zellzykluskontrolle und die Unterdrückung einer unangemessenen somatischen Differenzierung koordinieren. Eine Störung von Nanos3 wird mit Keimzellverlust und Infertilitätsphänotypen in Verbindung gebracht, was es für Studien der Reproduktionsbiologie und der Mechanismen relevant macht, die die Genomintegrität in der Keimbahn schützen. Als Keimbahnregulator wird NANOS3 zudem als Marker und funktioneller Knotenpunkt genutzt, um Entwicklungstrajektorien und Stressantworten in frühen gonadalen Zelllinien zu untersuchen.

Das Nanos3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nanos3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nanos3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nanos3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nanos3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nanos3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nanos3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nanos3-Exone abzielen, die für die Nanos3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nanos3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nanos3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nanos3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nanos3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nanos3 HDR-Plasmid (m) und Nanos3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nanos3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nanos3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.