Plasmide CRISPR d'Activation (h) NACA1: sc-408139-ACT

Le gène humain **NACA** code la sous-unité alpha du complexe associé aux polypeptides naissants (NACA1), un chaperon associé au ribosome qui se lie aux chaînes polypeptidiques en cours d’émergence et aide à coordonner le repliement co‑traductionnel, l’adressage et le contrôle qualité. NACA1 agit avec sa sous-unité partenaire pour moduler les interactions de la chaîne naissante au niveau du tunnel de sortie du ribosome, influençant la biogenèse des protéines et les voies de protéostasie liées au ciblage vers le réticulum endoplasmique et aux réponses adaptatives au stress. En façonnant l’équilibre entre une traduction productive et la prise en charge des protéines mal repliées, NACA1 est pertinente dans des états cellulaires caractérisés par un contrôle traductionnel altéré, notamment les programmes prolifératifs et la signalisation du stress. Une dérégulation de l’expression de NACA/NACA1 a été rapportée dans de multiples contextes associés à des maladies, ce qui motive des études mécanistiques sur la manière dont la régulation co‑traductionnelle influence le destin cellulaire et les réseaux transcriptionnels.

NACA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NACA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NACA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NACA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NACA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NACA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NACA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NACA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NACA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NACA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.