NAB2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402117-ACT

NAB2 (NGFI-A binding protein 2) è un coregolatore trascrizionale nucleare che modula le risposte dei geni a espressione immediata interagendo con i fattori di trascrizione della famiglia EGR, plasmando programmi dipendenti dallo stimolo che controllano differenziamento, proliferazione e adattamento cellulare allo stress. Influenzando gli output trascrizionali a valle della segnalazione collegata a MAPK/ERK e di altre vie regolata dall’attività, NAB2 contribuisce a calibrare reti geniche coinvolte nel controllo della crescita e nella specificazione di linea cellulare. Un’alterata regolazione di NAB2 è rilevante per stati trascrizionali aberranti osservati nella biologia dei tumori e in altri disordini proliferativi, e fusioni geniche di NAB2 ed espressione deregolata sono state associate a processi tumorigenici in contesti specifici. Queste proprietà rendono NAB2 un bersaglio utile per analizzare le dinamiche tra fattori di trascrizione e coregolatori e per mappare circuiti di espressione genica responsivi agli stimoli nelle cellule umane.

NAB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NAB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NAB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NAB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NAB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NAB2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NAB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NAB2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NAB2 nelle cellule tumorali con espressione di NAB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.