Plásmido CRISPR de Activación (h) N4BP2: sc-412585-ACT

N4BP2 (proteína de unión a NEDD4 2) es una gran proteína intracelular implicada en la señalización dependiente de ubiquitina gracias a su interacción descrita con ligasas E3 de la familia NEDD4, lo que la vincula a la regulación del recambio proteico y la transducción de señales. Se ha asociado con el control de la organización del citoesqueleto y la motilidad celular, en consonancia con funciones en la dinámica de la adhesión y el tráfico intracelular. Los patrones de expresión y de alteraciones genéticas de N4BP2 se han estudiado en contextos oncológicos e inmunitarios, lo que respalda su relevancia en vías que modulan la proliferación, las respuestas al estrés y la señalización inflamatoria. Estas características convierten a N4BP2 en una diana útil para analizar la comunicación cruzada de la vía de la ubiquitina y los programas transcripcionales posteriores en modelos celulares humanos.

N4BP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de N4BP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

N4BP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus N4BP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional N4BP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de N4BP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo N4BP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de N4BP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía N4BP2 en células tumorales con expresión de N4BP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.