N4BP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406515

Descripción general

N4BP1 (proteína 1 de unión a NEDD4) es una proteína asociada a ubiquitina y vinculada a endosomas, implicada en la regulación de la señalización dependiente de ubiquitina y de las vías de tráfico de proteínas. Se ha descrito que actúa como un regulador negativo de la señalización inmunitaria innata, influyendo en las respuestas aguas abajo de los receptores de reconocimiento de patrones y modulando programas transcripcionales asociados a NF-κB. Mediante interacciones con componentes de la vía de la ubiquitina y complejos asociados a membrana, N4BP1 puede afectar la homeostasis inmunitaria, la señalización inflamatoria y las respuestas al estrés celular. La actividad alterada de N4BP1 se ha investigado en el contexto de la desregulación inmunitaria y mecanismos de enfermedad relacionados con la inflamación, lo que respalda su relevancia para la genómica funcional centrada en vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO N4BP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen N4BP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del N4BP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de N4BP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína N4BP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en N4BP1 para la investigación de la señalización de N4BP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de N4BP1 críticos para la función de N4BP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de N4BP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido N4BP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido N4BP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus N4BP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR N4BP1 (h) y el plásmido HDR N4BP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología N4BP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana N4BP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.