Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myosin XVIIIA: sc-403216-ACT

Le gène humain **MYO18A** code la myosine XVIIIA, un moteur non conventionnel associé à l’actine, impliqué dans l’organisation du cytosquelette cortical, la régulation de la forme cellulaire et la coordination du transport intracellulaire ainsi que des dynamiques liées à l’adhérence. Grâce à ses interactions avec la F-actine et des complexes d’échafaudage, MYO18A contribue à des processus tels que le trafic vésiculaire, l’organisation de l’appareil de Golgi et le remodelage associé à la migration, en lien avec la signalisation des GTPases Rho et les voies de mécanotransduction. Des altérations de l’expression de MYO18A et une dysrégulation du cytosquelette ont été étudiées dans le contexte de comportements cellulaires invasifs et de signalisations prolifératives aberrantes, ce qui étaye sa pertinence pour des phénotypes associés aux maladies. Ces caractéristiques font de MYO18A un nœud utile pour étudier la manière dont les moteurs à base d’actine couplent le trafic membranaire à l’architecture du cytosquelette dans les cellules humaines.

Myosin XVIIIa Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYO18A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myosin XVIIIa Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYO18A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYO18A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myosin XVIIIa. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYO18A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myosin XVIIIa au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myosin XVIIIa dans les cellules tumorales présentant une expression de MYO18A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.