Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin VIIB (m): sc-421802

Présentation

Myo7b code la myosine VIIB, une protéine motrice dépendante de l’actine, enrichie dans les cellules épithéliales polarisées, où elle contribue au remodelage du cytosquelette, au trafic apical et au maintien de l’architecture des microvillosités. Grâce à ses interactions avec les filaments d’actine et des complexes associés aux membranes, la myosine VIIB soutient l’assemblage de la bordure en brosse et l’organisation de protéines membranaires impliquées dans l’absorption et la fonction barrière. La perturbation des processus dépendants de MYO7B est liée à des dysfonctionnements épithéliaux et à une altération de l’homéostasie intestinale, ce qui en fait une cible utile pour étudier la polarité, la dynamique des jonctions cellulaires et les spécialisations de surface. Les modèles murins Myo7b aident à analyser des voies conservées reliant l’activité des moteurs à actine à la morphogenèse épithéliale et au maintien des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin VIIB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Myo7b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Myo7b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Myo7b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin VIIB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Myo7b pour l'étude de la signalisation de Myosin VIIB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Myo7b essentiels à la fonction de Myosin VIIB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Myo7b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin VIIB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Myosin VIIB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Myo7b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin VIIB plasmide HDR (m) et le Myosin VIIB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Myo7b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Myo7b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.