Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421802

Übersicht

Myo7b kodiert Myosin VIIB, ein aktinbasiertes Motorprotein, das in polarisierten Epithelzellen angereichert ist und dort zum Umbau des Zytoskeletts, zum apikalen Transport und zur Aufrechterhaltung der Mikrovillus-Architektur beiträgt. Durch Interaktionen mit Aktinfilamenten und membranassoziierten Komplexen unterstützt Myosin VIIB den Aufbau des Bürstensaums sowie die Organisation von Membranproteinen, die an Absorption und Barrierefunktion beteiligt sind. Eine Störung MYO7B-abhängiger Prozesse ist für Epithelfunktionsstörungen und eine veränderte intestinale Homöostase relevant und macht MYO7B zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Polarität, Dynamik von Zell-Zell-Kontakten und Oberflächenspezialisierung. Mausmodelle für Myo7b helfen dabei, konservierte Signalwege zu analysieren, die die Aktivität von Aktinmotoren mit epithelialer Morphogenese und Gewebehomöostase verknüpfen.

Das Myosin VIIB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Myo7b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Myo7b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Myo7b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin VIIB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Myo7b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin VIIB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Myo7b-Exone abzielen, die für die Myosin VIIB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Myo7b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin VIIB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Myosin VIIB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Myo7b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin VIIB HDR-Plasmid (m) und Myosin VIIB HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Myo7b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Myo7b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.