Myosin IXa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407473

Übersicht

MYO9A kodiert Myosin IXa, ein unkonventionelles, aktinbasiertes Motorprotein, das zudem eine Rho‑GTPase‑aktivierende (RhoGAP-)Domäne enthält und damit die Zytoskelettdynamik mit der Signalübertragung kleiner GTPasen verknüpft. Durch die Regulation von Aktin-Remodeling, Membranprotrusion und Zelladhäsion trägt Myosin IXa zur Zellpolarität und gerichteten Migration bei und kann RhoA‑abhängige Signalwege beeinflussen, die Kontraktilität und die Organisation von Zellkontakten steuern. Diese Funktionen positionieren MYO9A als mechanistischen Knotenpunkt in Prozessen wie epithelialer Morphogenese, Neuritenauswachsung und intrazellulärem Transport, in denen koordinierte Motoraktivität und Rho‑Signalgebung erforderlich sind. Eine Fehlregulation der zytoskelettalen Kontrolle und der Rho‑Signalwege ist an zahlreichen menschlichen Erkrankungen beteiligt, wodurch MYO9A ein relevantes Ziel für die Untersuchung krankheitsassoziierter Veränderungen in Motilität, Barrierefunktion und morphodynamischer Signalgebung darstellt.

Das Myosin IXa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYO9A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYO9A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYO9A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin IXa-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYO9A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin IXa-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYO9A-Exone abzielen, die für die Myosin IXa-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYO9A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin IXa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Myosin IXa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYO9A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin IXa HDR-Plasmid (h) und Myosin IXa HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYO9A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYO9A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.