Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin IXa (h): sc-407473

Présentation

MYO9A code la myosine IXa, une protéine motrice non conventionnelle basée sur l’actine, qui contient également un domaine d’activation de l’activité GTPasique de Rho (RhoGAP), reliant la dynamique du cytosquelette à la signalisation des petites GTPases. En régulant le remodelage de l’actine, la formation de protrusions membranaires et l’adhésion cellulaire, la myosine IXa contribue à la polarité cellulaire et à la migration dirigée, et peut influencer des voies dépendantes de RhoA contrôlant la contractilité et l’organisation des jonctions. Ces fonctions placent MYO9A comme un nœud mécanistique dans des processus tels que la morphogenèse épithéliale, la croissance des neurites et le trafic intracellulaire, où une activité motrice coordonnée et une signalisation Rho sont nécessaires. La dérégulation du contrôle du cytosquelette et de la signalisation des voies Rho est impliquée dans diverses pathologies humaines, faisant de MYO9A une cible pertinente pour étudier les modifications liées aux maladies affectant la motilité, la fonction barrière et la signalisation morphodynamique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin IXa (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO9A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO9A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO9A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin IXa.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO9A pour l'étude de la signalisation de Myosin IXa, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO9A essentiels à la fonction de Myosin IXa
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO9A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin IXa plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin IXa plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO9A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin IXa plasmide HDR (h) et le Myosin IXa (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO9A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO9A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.