Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYL2: sc-402798-ACT

MYL2 code la chaîne légère régulatrice ventriculaire/cardiaque de la myosine 2, un composant du complexe de myosine II sensible au Ca2+ qui module le cycle des ponts actine–myosine et la génération de force contractile dans le muscle strié. Grâce à un contrôle de l’activité motrice de la myosine dépendant de la phosphorylation, MYL2 contribue à l’organisation du sarcomère, à la mécanique des cardiomyocytes et aux voies de couplage excitation–contraction qui coordonnent le débit cardiaque. Une expression ou une fonction altérée de MYL2 est impliquée dans des cardiomyopathies héréditaires et acquises, où une régulation sarcomérique perturbée peut affecter la structure et les performances du myocarde. En tant que marqueur et régulateur de la différenciation et de la contractilité du muscle cardiaque, MYL2 est largement utilisé dans les études du développement cardiaque, la modélisation des maladies et la mécanobiologie.

MYL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.