MYH6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400351

Übersicht

MYH6 kodiert die Alpha-Schwerkette des kardialen Myosin II, ein zentrales Motorprotein des Sarkomers, das in quergestreifter Muskulatur die aktinabhängige Erzeugung kontraktiler Kraft antreibt. Über ATPase-getriebenes Querbrücken-Zyklisieren trägt MYH6 zur Organisation der Myofibrillen, zur kalziumsensitiven Kontraktilität und zur Entwicklung des Herzmuskels bei und ist in Signalwege eingebunden, die den Aufbau des Sarkomers und die Mechanotransduktion regulieren. Eine veränderte MYH6-Expression oder Sequenzvariation ist mit erblichen Kardiomyopathien und Phänotypen angeborener Herzfehler assoziiert, was seine zentrale Rolle für die Myokardfunktion widerspiegelt. Als gewebeangereichertes Kontraktionsgen wird MYH6 häufig eingesetzt, um in zellulären und genetischen Modellsystemen die Reifung von Kardiomyozyten, Stressantworten und strukturelles Remodeling zu untersuchen.

Das MYH6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYH6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYH6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYH6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MYH6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYH6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MYH6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYH6-Exone abzielen, die für die MYH6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYH6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MYH6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MYH6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYH6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MYH6 HDR-Plasmid (h) und MYH6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYH6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYH6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.