Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH11: sc-400695-ACT

MYH11 codifica la cadena pesada 11 de la miosina del músculo liso, un componente central del aparato contráctil actomiosina que impulsa la generación de fuerza y la remodelación del citoesqueleto en células de músculo liso vascular y visceral. Mediante una interacción dependiente de ATP con los filamentos de actina, MYH11 contribuye a la contractilidad, al control de la forma celular y a programas de mecanotransducción que se conectan con la señalización de calcio, la dinámica de actina mediada por RhoA/ROCK y el recambio de las adhesiones focales. La alteración de la expresión de MYH11 o de su integridad estructural puede perturbar la diferenciación del músculo liso y la función contráctil, favoreciendo la inestabilidad de la pared vascular y una biomecánica tisular deficiente. MYH11 también está implicado en fusiones génicas oncogénicas en neoplasias mieloides, lo que subraya su relevancia para el estudio de la regulación transcripcional aberrante y de fenotipos específicos de linaje.

MYH11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH11 en células tumorales con expresión de MYH11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.