MYBBP1A Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422090-ACT

Mybbp1a codifica la proteina murina MYBBP1A (MYB-binding protein 1A), un coregolatore trascrizionale prevalentemente nucleolare che integra la segnalazione associata alla cromatina con la biogenesi dei ribosomi e il controllo del ciclo cellulare. È stato riportato che MYBBP1A modula programmi trascrizionali legati all’attività della RNA polimerasi I, alle risposte allo stress nucleolare e alla regolazione metabolica, influenzando la crescita e la proliferazione cellulare. Attraverso interazioni con fattori di trascrizione e complessi di modificazione della cromatina, MYBBP1A può incidere su vie che governano la differenziazione e l’espressione genica adattativa allo stress. Alterazioni dell’espressione o della funzione di MYBBP1A sono associate a fenotipi di proliferazione deregolata e di mantenimento del genoma, rilevanti per la biologia del cancro e per altri contesti in cui la funzione nucleolare e l’omeostasi trascrizionale risultano perturbate.

MYBBP1A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mybbp1a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYBBP1A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mybbp1a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mybbp1a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYBBP1A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mybbp1a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYBBP1A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYBBP1A nelle cellule tumorali con espressione di Mybbp1a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.