MYBBP1A CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422090-ACT

Mybbp1a はマウスの MYBBP1A（MYB結合タンパク質1A）をコードしており、主に核小体に局在する転写コレギュレーターとして、クロマチン関連シグナル伝達をリボソーム生合成および細胞周期制御と統合する。MYBBP1A は、RNAポリメラーゼI活性、核小体ストレス応答、代謝制御に関連する転写プログラムを調節し、細胞の成長と増殖に影響を与えることが報告されている。転写因子やクロマチン修飾複合体との相互作用を通じて、MYBBP1A は分化やストレス適応的な遺伝子発現を制御する経路にも影響し得る。MYBBP1A の発現量や機能の変化は、増殖制御の破綻やゲノム維持に関わる表現型の異常と関連しており、核小体機能や転写恒常性が乱れるがん生物学などの文脈で重要である。

MYBBP1A CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mybbp1aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYBBP1A CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mybbp1a 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMybbp1a転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYBBP1Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMybbp1a遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYBBP1A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMybbp1a発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYBBP1A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。