Plasmide CRISPR d'Activation (h) musculin: sc-403242-ACT

Le gène humain **MSC** code la **musculine**, un facteur de transcription à hélice‑boucle‑hélice basique (bHLH) qui régule des programmes d’expression génique spécifiques de lignée grâce à une liaison à l’ADN dépendante de la séquence et à des interactions coopératives avec d’autres régulateurs transcriptionnels. La musculine influence les décisions de destinée cellulaire et les réseaux transcriptionnels associés à la différenciation, notamment dans des contextes myogéniques et immunitaires où les facteurs bHLH coordonnent l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle. En modulant des gènes cibles en aval impliqués dans la prolifération, la différenciation et la signalisation de réponse au stress, **MSC** contribue au maintien de l’identité cellulaire et au remodelage des programmes géniques du développement. Une expression dérégulée de **MSC** a été rapportée dans divers contextes biologiques pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud d’étude du recâblage transcriptionnel et des perturbations de voies de signalisation dans les cellules humaines.

musculin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MSC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

musculin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MSC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MSC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de musculin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MSC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de musculin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie musculin dans les cellules tumorales présentant une expression de MSC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.