Munc13-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423611

Übersicht

Unc13b kodiert Munc13-2, einen präsynaptischen Priming-Faktor der aktiven Zone, der für die Reifung synaptischer Vesikel in einen unmittelbar freisetzbaren Zustand sowie für eine effiziente, Ca²⁺-ausgelöste Neurotransmitterfreisetzung erforderlich ist. Munc13-2 wirkt mit SNARE-Regulatoren und dem RIM/Rab3-Netzwerk zusammen, um Andocken, Priming und Kurzzeitplastizität zu koordinieren, und prägt dadurch synaptische Stärke und Schaltkreisaktivität. Über seine C1- und C2-Domänen integriert Munc13-2 diacylglycerol- und Ca²⁺-abhängige Signale, um die Freisetzungswahrscheinlichkeit und die Dynamik der Vesikelpools zu feinzujustieren. Eine Fehlregulation des Vesikel-Primings und der synaptischen Transmission ist für neuroentwicklungsbedingte und neuropsychiatrische Phänotypen breit relevant, was mechanistische Studien zu Unc13b in der neuronalen Signalübertragung und bei Netzwerkdysfunktionen motiviert.

Das Munc13-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Unc13b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Unc13b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Unc13b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Munc13-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Unc13b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Munc13-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Unc13b-Exone abzielen, die für die Munc13-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Unc13b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Munc13-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Munc13-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Unc13b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Munc13-2 HDR-Plasmid (m) und Munc13-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Unc13b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Unc13b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.