Plasmide CRISPR d'Activation (h) MUL1: sc-409323-ACT

La MUL1 humaine (mitochondrial ubiquitin ligase activator of NF-κB 1), également connue sous les noms de Mulan/MAPL, code une ligase E3 de l’ubiquitine située sur la membrane externe de la mitochondrie, qui contribue au contrôle qualité mitochondrial via l’ubiquitination de substrats mitochondriaux. MUL1 interfère avec la dynamique mitochondriale en modulant les machineries de fusion et de fission et participe à la mitophagie, influençant ainsi l’homéostasie bioénergétique et l’adaptation cellulaire au stress. Grâce à des interactions avec la signalisation ubiquitine et des voies de stress innées, MUL1 peut moduler la susceptibilité à l’apoptose et les sorties de signalisation inflammatoire. Une activité ou une expression dérégulée de MUL1 a été impliquée dans des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques et les réponses au stress des cellules cancéreuses, ce qui en fait un nœud mécanistique d’intérêt pour la recherche sur la signalisation mitochondriale.

MUL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MUL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MUL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MUL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MUL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.