Mucin 2/MUC2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421751-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Mucin 2/MUC2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Mucin 2/MUC2 Double Nickase Plasmid (m) e il Mucin 2/MUC2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Muc2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Mucin 2/MUC2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421751-NIC | 20 µg | $410.00 |
Muc2 codifica la mucina 2 (MUC2), una mucina secreta formante gel che costituisce la principale componente strutturale della barriera di muco intestinale nel topo. Attraverso un’estesa O-glicosilazione e la polimerizzazione, MUC2 contribuisce alla protezione dell’epitelio, alla segregazione spaziale del microbiota e alla regolazione dell’omeostasi immunitaria della mucosa. La sua espressione e maturazione sono associate ai programmi di differenziamento delle cellule caliciformi e ai processi della via secretoria, incluse le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico, mentre l’integrità dello strato di muco influenza le reti di segnalazione infiammatoria alla superficie epiteliale. Alterazioni della funzione o dell’espressione di Muc2 sono ampiamente utilizzate per modellare la disfunzione della barriera e l’infiammazione mucosale, con rilevanza per fenotipi associati alla colite e per meccanismi di malattia guidati dal microbioma.
Mucin 2/MUC2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Muc2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Muc2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Muc2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Muc2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.