Mucin 2/MUC2 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-400221-NIC

MUC2는 겔(gel)을 형성하며 분비되는 뮤신인 뮤신 2(mucin 2)를 암호화하는 유전자로, 장 점액 장벽의 주요 구조적 구성 요소이자 상피 표면의 수분 유지와 윤활을 결정하는 핵심 인자이다. MUC2는 광범위한 O-당화(O-glycosylation)와 중합(polymerization)을 통해 점막 방어에 기여하고, 숙주–미생물군 간 공간적 분리를 조절하며, 위장관에서 상피 항상성을 지지한다. 또한 그 발현과 가공 과정은 배상세포(goblet cell) 분화 프로그램, ER/골지 분비 경로 기능, 그리고 뮤신 네트워크 조립과 맞물려 있다. MUC2의 양 또는 뮤신 장벽 특성의 이상 조절은 염증성 장질환, 대장염 관련 염증, 그리고 대장암 생물학과 연관된 상피 스트레스 맥락에서 자주 연구된다.

Mucin 2/MUC2 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 MUC2 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 MUC2 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 MUC2의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, MUC2 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

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