Mucin 1/MUC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416876-ACT

MUC1 codifica la mucina 1, una mucina transmembrana fortemente glicosilata che contribuisce alla funzione di barriera epiteliale e all’organizzazione della superficie apicale tramite il suo dominio extracellulare, trasmettendo al contempo segnali attraverso la coda citoplasmatica. MUC1 partecipa alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e si interfaccia con vie che regolano la segnalazione dei recettori tirosina chinasi, la trascrizione dipendente da β-catenina e le risposte allo stress infiammatorio. Alterazioni dell’espressione, della localizzazione o delle glicoforme di MUC1 sono associate a disregolazione epiteliale e sono frequentemente studiate in contesti che coinvolgono segnalazione oncogenica, invasione e modulazione immunitaria. In quanto glicoproteina ancorata alla membrana, MUC1 è anche ampiamente utilizzata come modello per investigare la biologia delle mucine, le interazioni ligando-dipendenti dalla glicosilazione e il rimodellamento del surfaceoma.

Mucin 1/MUC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MUC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mucin 1/MUC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MUC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MUC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mucin 1/MUC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MUC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mucin 1/MUC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mucin 1/MUC1 nelle cellule tumorali con espressione di MUC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.