MTF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402846-ACT

MTF1 codifica o fator de transcrição 1 regulado por metais (MTF-1), uma proteína de ligação ao DNA do tipo dedo de zinco que orquestra programas transcricionais que controlam a homeostase de metais na célula e a adaptação ao estresse. Diante de flutuações de Zn2+ intracelular e de exposição a estresse oxidativo ou eletrofílico, o MTF-1 regula genes responsivos a metais envolvidos em desintoxicação e citoproteção, integrando sinais entre o controle redox, a proteostase e vias de estresse inflamatório. Esse circuito transcricional se cruza com processos ligados à deshomeostase de metais e ao dano oxidativo, frequentemente estudados em neurodegeneração, disfunção metabólica e carcinogênese. Como mediador central da regulação gênica responsiva ao estresse, o MTF-1 oferece um ponto acessível para dissecar como o sensoriamento de metais remodela redes transcricionais e decisões de destino celular.

MTF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MTF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MTF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MTF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MTF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MTF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MTF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MTF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MTF-1 em células tumorais com expressão de MTF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.