MTCL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403629-ACT

MTCL1 (fator 1 de ligação cruzada de microtúbulos) codifica uma grande proteína citosquelética do tipo coiled-coil que organiza e estabiliza redes de microtúbulos ao interligar microtúbulos entre si e promover seu acúmulo ao redor do aparelho de Golgi. Por meio de seu papel na ancoragem de microtúbulos e na formação de arranjos de microtúbulos não centrossomais, a MTCL1 contribui para a polaridade celular, o tráfego de vesículas e a migração direcionada, processos estreitamente ligados à sinalização dependente do citoesqueleto e à organização epitelial. A arquitetura desregulada dos microtúbulos e o posicionamento do Golgi são frequentemente associados a alterações de proliferação e comportamento invasivo, tornando a regulação de MTCL1 relevante para estudos de motilidade de células cancerígenas e morfogênese tecidual. A MTCL1 também é usada como um ponto de entrada mecanístico para investigar como a remodelação do citoesqueleto influencia a dinâmica de organelas e respostas celulares adaptativas ao estresse.

MTCL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MTCL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MTCL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MTCL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MTCL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MTCL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MTCL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MTCL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MTCL1 em células tumorais com expressão de MTCL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.