Plasmide Double Nickase (m) MTAP: sc-426257-NIC

Le gène murin *Mtap* code la méthylthioadénosine phosphorylase (MTAP), une enzyme clé de la voie de récupération de la méthionine qui convertit la 5′-méthylthioadénosine en adénine et en 5-méthylthioribose-1-phosphate, reliant ainsi le métabolisme des polyamines à l’homéostasie des purines et des donneurs de méthyle. L’activité de MTAP soutient l’équilibre des nucléotides, la capacité de méthylation et l’adaptabilité métabolique liée au statut rédox, en s’intégrant au métabolisme à un carbone et aux processus dépendants de la S-adénosylméthionine. Une expression altérée de MTAP ou sa perte peut remodeler les états métaboliques cellulaires et influencer les programmes associés à la prolifération via des modifications des réserves d’adénine et de la signalisation sensible à la méthylation. En recherche biomédicale, *Mtap* est couramment étudié pour son impact sur les vulnérabilités métaboliques, la régulation épigénétique et les réponses au stress dans les cellules et tissus de mammifères.

MTAP Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mtap dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mtap. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mtap. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mtap.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.