MT-MMP-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423912-ACT

O Mmp17 de camundongo codifica a metaloproteinase de matriz do tipo de membrana 4 (MT-MMP-4), uma endopeptidase dependente de zinco ancorada à membrana que remodela a matriz extracelular pericelular por meio da clivagem de proteínas da matriz e da modulação de substratos na superfície celular. A MT-MMP-4 contribui para cascatas proteolíticas que envolvem a ativação de MMPs, a renovação da MEC e a dinâmica da membrana basal, influenciando a migração e a adesão celulares, bem como a morfogênese tecidual. Ao moldar a arquitetura estromal e a sinalização dependente de proteases, o Mmp17 é relevante para estudos de fibrose, remodelamento associado à inflamação e biologia do microambiente tumoral, nos quais a proteólise alterada pode afetar a invasão e programas angiogênicos.

MT-MMP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mmp17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MT-MMP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mmp17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mmp17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MT-MMP-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mmp17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MT-MMP-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MT-MMP-4 em células tumorais com expressão de Mmp17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.