MT-MMP-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421673-ACT

O gene Mmp16 de camundongo codifica a MT-MMP-3 (também conhecida como MMP16), uma metaloproteinase de matriz ancorada à membrana que medeia a proteólise pericelular e a remodelação da matriz extracelular. Ao processar componentes da matriz e ativar outras MMPs, como a pro-MMP2, a MT-MMP-3 influencia a migração e a invasão celulares, bem como a morfogênese tecidual, em redes de sinalização dependentes de proteases. Sua atividade interage com vias que regulam transições epitélio–mesênquima, adesão dependente de integrinas e a disponibilidade de fatores de crescimento por meio da renovação da matriz. A desregulação da expressão de Mmp16 ou do equilíbrio proteolítico tem sido associada a contextos de remodelação patológica, incluindo fibrose, microambientes inflamatórios e modelos de progressão tumoral nos quais a degradação da matriz e a motilidade celular são fenótipos centrais.

MT-MMP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mmp16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MT-MMP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mmp16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mmp16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MT-MMP-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mmp16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MT-MMP-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MT-MMP-3 em células tumorais com expressão de Mmp16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.