MT-MMP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401028-ACT

O MMP14 codifica a metaloproteinase de matriz do tipo membrana 1 (MT-MMP-1), uma protease de superfície celular que promove a remodelação pericelular da matriz extracelular ao clivar colágenos, lamininas e outros componentes da matriz, além de ativar a pro-MMP2. Por meio da regulação da renovação das adesões focais, da sinalização por integrinas e da dinâmica epitélio–mesênquima, a MT-MMP-1 sustenta programas de migração e invasão celular centrais para a morfogênese tecidual e a remodelação de feridas. Sua atividade se cruza com a sinalização de TGF-β e de fatores de crescimento para coordenar a proteólise com a reorganização do citoesqueleto e a deposição de matriz. A expressão desregulada de MMP14 e a função proteolítica da MT-MMP-1 têm sido associadas à biologia tumoral invasiva, à remodelação fibrótica e ao dano tecidual inflamatório, tornando-a um ponto amplamente utilizado para estudar a sinalização dependente da MEC e o controle microambiental do comportamento celular.

MT-MMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MT-MMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MT-MMP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MT-MMP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MT-MMP-1 em células tumorais com expressão de MMP14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.